愛華網(wǎng)蛋白印跡是很多的試驗器器材中常見的器材之一，很多的需求者想買到便宜的，那么下面介紹一下蛋白印跡的使用注意事項有哪些：
蛋白印跡的使用注意事項有哪些――方法/步驟蛋白印跡的使用注意事項有哪些 1、
一抗的選擇是影響免疫印跡成敗的主要因素。多克隆抗體結(jié)合抗原能力較強、靈敏度高，但易產(chǎn)生非特異性的背景;單克隆抗體識別抗原特異性較好，但可能不識別在樣品制備時因變性而失去了空間構(gòu)型的抗原表位，且易發(fā)生交叉反應。因此，兼有多克隆抗體和單克隆抗體優(yōu)點的混合單克隆抗體近年特別被推薦，它是由一組能與抗原分子中的不同且不易變性的抗原表位結(jié)合并不易出現(xiàn)交叉反應的單克隆抗體混合構(gòu)成。
蛋白印跡的使用注意事項有哪些 2、
使用化學發(fā)光檢測時，試劑須按需要量臨用前配置混合。
蛋白印跡的使用注意事項有哪些 3、
一般情況使用0.45μm的NC膜，0.1～0.2μm的小孔徑膜只適合于分子量小于20kD的蛋白質(zhì)。
蛋白印跡的使用注意事項有哪些 4、
如果出現(xiàn)非特異性的高背景，可觀察僅用二抗單獨處理轉(zhuǎn)印膜所產(chǎn)生的背景強度，若高背景確由二抗產(chǎn)生，可適當降低二抗?jié)舛然蚩s短二抗孵育時間;并考慮延長每一步的清洗時間。
蛋白印跡的使用注意事項有哪些 5、
一抗與二抗的稀釋度、作用時間和溫度對檢測不同的蛋白要求不同，須經(jīng)預實驗確定最佳條件。
蛋白印跡的使用注意事項有哪些 6、
濾紙/凝膠/轉(zhuǎn)印膜/濾紙夾層組合中不能存在氣泡，可用玻璃棒在夾層組合上滾動將氣泡趕出，以提高轉(zhuǎn)膜效率;上下兩層濾紙不能過大，避免導致直接接觸而引起短路。
蛋白印跡的使用注意事項有哪些_蛋白印跡
蛋白印跡的使用注意事項有哪些 7、
PVDF尼龍膜較NC膜柔軟、結(jié)實、靈敏度高，易于操作且蛋白質(zhì)結(jié)合能力強(PVDF膜可結(jié)合蛋白質(zhì)480μg/cm2，而NC膜只能結(jié)合蛋白質(zhì)80μg /cm2);缺點是PVDF尼龍膜背景也高，需要加強封閉;此外，PVDF尼龍膜若在使用前先行甲醇處理5～10s，以活化膜表面的正電基團，使它更容易與帶負電的蛋白質(zhì)結(jié)合，可提高蛋白質(zhì)在膜上的保留指數(shù)。
蛋白印跡的使用注意事項有哪些 8、
如果反應靈敏度不高，可增加凝膠的厚度到1.5mm(厚度超過2.0mm時，凝膠轉(zhuǎn)移效率受限);也可在電泳條帶不發(fā)生變形的前提下，盡量提高蛋白樣品的上樣量。憶立賦一站式采購平臺，正品保證，限時折扣。
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