愛華網(wǎng)（1）按照前述方法取材，將組織剪成或切成1mm3大小的小塊，并加入少許培養(yǎng)基使組織濕潤。
（2）將小塊均勻涂布于瓶壁，每小塊間距0.2cm~0.5cm，一般在25mL培養(yǎng)瓶（底面積為17.5cm2）可接種20~30小塊為宜，小塊放置后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使瓶底朝上，然后于瓶內(nèi)加入適量培養(yǎng)基蓋好瓶塞，將瓶傾斜放置在37℃溫箱內(nèi)。
（3）培養(yǎng)2~4小時，待小塊貼附后，將培養(yǎng)瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放，靜置培養(yǎng)，動作要輕，嚴禁搖動和來回振蕩，以防由于沖動而使小塊漂起而造成培養(yǎng)失敗，若組織塊不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。開始培養(yǎng)時培養(yǎng)基不宜多，以保持組織塊濕潤即可，培養(yǎng)24小時后再補液，培養(yǎng)初期移動和觀察時要輕拿輕放，開始幾天盡量不去搬動，以利貼壁和生長，培養(yǎng)3~5天時可換液，一方面補充營養(yǎng)，一方面去除代謝產(chǎn)物和漂浮小塊所產(chǎn)生的毒性作用。
2、消化培養(yǎng)法
該方法是采用前述的消化分散法，將妨礙細胞生長的細胞間質(zhì)（包括基質(zhì)、纖維等）去除，使細胞分散形成細胞懸液，然后分瓶培養(yǎng)。
3、懸浮細胞培養(yǎng)法：對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
一、原代細胞的培養(yǎng)與維持
1、靜置貼壁細胞（包括半貼壁細胞的培養(yǎng)）
凡經(jīng)消化液處理實體組織來源的細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性，細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L,培養(yǎng)基可用Eagle（MEM）或DNEM培養(yǎng)，小牛血清濃度為10%~80%。在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂浮。
貼壁細胞長成網(wǎng)狀或基本單層時，由于營養(yǎng)缺乏，代謝產(chǎn)物增多，pH變酸，不適宜細胞生長，此時細胞還未長成單層，未達到飽和密度，仍需繼續(xù)培養(yǎng)，因此，需采取換液方式來更新營養(yǎng)成分以滿足細胞繼續(xù)生長繁殖的需要。其換液方法比較簡單，即棄去舊液，加入與原培養(yǎng)液相同的等量完全培養(yǎng)基。
2、懸浮細胞的培養(yǎng)
凡來自外周血、胸腹水、脾臟、淋巴結(jié)、骨髓的淋巴細胞、造血干細胞以及白血病細胞，在原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞。若要將淋巴細胞及白血病細胞進行長期培養(yǎng)，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長，待細胞開始增殖甚至結(jié)成小團塊，培養(yǎng)基中pH變酸，說明細胞生長繁殖良好，一般每隔3天需半量換液一次（換液時盡量使細胞不丟失），待細胞增殖加快，濃度明顯增加，pH發(fā)生明顯變化時，此時可考慮傳代。
懸浮細胞在未達到飽和密度時，但培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分并不能維持細胞的營養(yǎng)需求時，只能采用半量換液的方式。
二、原代細胞培養(yǎng)的首次傳代 （Subculture）
這種使原代細胞經(jīng)分散接種的過程稱之為傳代。每進行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代，傳至5~10代以內(nèi)的細胞通常稱為次代培養(yǎng)細胞，傳至10~20代以上的細胞，通常確定為傳代細胞（或稱傳代細胞系）。傳代細胞系的建立，關(guān)鍵是初代培養(yǎng)的首次傳代。應(yīng)注意如下幾點：
（1）細胞生長 密度不高時，或未能達到覆蓋整個瓶底時不能急于傳代。
（2）原代培養(yǎng)的貼壁細胞多為混雜細胞，形態(tài)各異，往往是上皮樣細胞和成纖維樣細胞并存，采用胰蛋白酶消化時要掌握好消化時間，因成纖維細胞易于脫壁，上皮細胞不易脫壁，因此，可根據(jù)需要選用適當?shù)南瘯r間及時中止消化。在早先傳代時，其消化時間比一般已建系的細胞相對長一些。
（3）吹打已消化的細胞要輕巧，既不能聽到有明顯的吹打聲，又不能有大量泡沫在懸液中形成，以盡可能減少對細胞的機械損傷。
（4）首次傳代時細胞接種數(shù)量要多一些，以利于細胞的生存和繁殖。如果消化分離的細胞懸液有組織塊，也一并傳入到培養(yǎng)瓶，盡量減少細胞損失。
（5）首次傳代培養(yǎng)時的pH不能高，寧可偏低一些。此外，小牛血清濃度可適當加大至15%~20%左右。
