DNA指的是脫氧核糖核酸,病毒的復(fù)制是靠DNA的復(fù)制來完成的,DNA的濃度越高,病毒的復(fù)制越活躍。合起來,HBV-DNA指的就是乙肝病毒的脫氧核糖核酸。乙肝病毒DNA檢測是判斷乙肝病毒復(fù)制的常用手段。一般的,把數(shù)值大于乙肝dna定量正常值10的3次方為陽性,把3-5次方認(rèn)為是低量復(fù)制,5-7為中等量,大于7次方為大量。乙肝兩對半并不能準(zhǔn)確的判斷病毒復(fù)制情況,DNA彌補(bǔ)了這個(gè)的不足。不過由于DNA檢測技術(shù)要求嚴(yán)格,容易受到干擾,因此,一次結(jié)果不足以說明問題,遇到陽性,可以換醫(yī)院再次檢查。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -簡介
乙肝病毒(HBV)結(jié)構(gòu)示意圖
一般乙肝病毒DNA檢測,把數(shù)值大于10的3次方為陽性,把3-5次方認(rèn)為是低量復(fù)制,5-7為中等量,大于7次方為大量。乙肝兩對半并不能準(zhǔn)確的判斷病毒復(fù)制情況,DNA彌補(bǔ)了這個(gè)的不足。不過由于DNA檢測技術(shù)要求嚴(yán)格,容易受到干擾,因此,一次結(jié)果不足以說明問題,遇到陽性,可以換醫(yī)院再次檢查。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -正常值
以往乙肝患者抗病毒治療的指征是:乙肝病毒e抗原陽性(大三陽)患者HBVDNA數(shù)值要求達(dá)到10的5次方拷貝/毫升(20000U/ml),乙肝病毒e抗原陰性(小三陽)患者乙肝病毒DNA[1]數(shù)值要求達(dá)到10的4次方拷貝/毫升(2000U/ml),但是10的4次方拷貝/毫升以下也不能認(rèn)為就沒有問題了,最新的國際研究資料表明:和肝臟疾病進(jìn)展相關(guān)的病毒DNA水平域值尚不清楚,即使HBVDNA水平持續(xù)低于20000U/ml,也可能乙肝病毒情仍在進(jìn)一步發(fā)展,因此HBVDNA數(shù)值應(yīng)該越低越好,目前國際建議的HBVDNA檢測正常值應(yīng)該是:<50U/ml。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -作用
目前,乙肝病毒DNA[2]檢測在乙肝檢查化驗(yàn)中使用的越來越普遍,可見乙肝病毒DNA檢測在乙肝檢查化驗(yàn)中占的分量越來越重,這是因?yàn)橐腋尾《綝NA檢測對確診乙肝和評估乙肝治療效果具有十分重要的作用。主要表現(xiàn)在以下七個(gè)方面:
1、了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量。
2、乙肝病毒是否復(fù)制。
3、乙肝是否傳染,傳染性有多強(qiáng)。
4、是否有必要服藥。
5、肝功能異常改變是否由病毒引起。
6、判斷病人是適合用哪類抗病毒藥物。
7、判斷藥物治療的療效。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -臨床意義
所以說HBV―DNA定量檢測指標(biāo)降低在乙肝治療中有著非常重要的意義,是乙肝轉(zhuǎn)陰的前奏,也是康復(fù)最為關(guān)鍵的一步,只有體內(nèi)的HBV―DNA定量指標(biāo)降低,病毒的復(fù)制繁殖才會(huì)停止,乙肝的徹底治愈才有希望。
1、肝功能可探測有無疾病和肝損害程度
肝功能在臨床上檢查的目的在于探測肝臟有無疾病、肝臟損害程度以及查明肝病原因、判斷預(yù)后和鑒別發(fā)生黃疸的病因等。
常用的肝功能檢查項(xiàng)目有丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)或稱谷-丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)或稱谷-草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、總膽汁酸、白蛋白/球蛋白(A/G)、總膽紅素(T-BiL)和直接膽紅素(D-BiL)。
在各種酶實(shí)驗(yàn)中,ALT和AST能敏感地反映肝細(xì)胞損傷與否及損傷程度。各種急性病毒性肝炎、藥物或酒精引起急性肝細(xì)胞損傷時(shí),血清ALT最敏感,在臨床癥狀如黃疸出現(xiàn)之前ALT就急劇升高,同時(shí)AST也升高。
當(dāng)患有乙肝、藥物或酒精引起的中毒性肝炎、溶血性黃疸、惡性貧血、陣發(fā)性血紅蛋白尿癥及新生兒黃疸、內(nèi)出血等時(shí),都可以出現(xiàn)總膽紅素升高。當(dāng)患者患有肝臟纖維化或肝硬化時(shí),會(huì)出現(xiàn)血清白蛋白和總膽紅素降低。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -檢測方法
主要有:熒光定量PCR技術(shù)、競爭PCR技術(shù)、PCR酶聯(lián)免疫吸附法、熒光標(biāo)記引物法和PCR酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光法。
臨床上最先進(jìn)的乙肝病毒DNA檢測方法是實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,由于此技術(shù)要求較高,目前只有少數(shù)大型醫(yī)院有條件使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -如何看乙肝病毒DNA檢測報(bào)告

1、乙肝病毒DNA檢測報(bào)告:主要包括定性和定量;
2、定性,即確定是陰性還是陽性。乙肝病毒DNA的正常值為陰性,即乙肝病毒DNA<1乘以10的3次方拷貝/ml;
3、定性測得的陽性通常說明病毒容易傳染給他人,陰性說明不容易傳給他人。對于乙肝大三陽來說,由于乙肝病毒e抗原(HBeAg)是陽性,所以乙肝病毒-DNA也是陽性的,表示乙肝病毒-DNA>1x10的3次方拷貝/ml,這時(shí)體內(nèi)的乙肝病毒復(fù)制活躍。
4、定量,即檢測乙肝病毒在血液中的含量。定量檢測結(jié)果主要是對抗病毒治療提供檢測和療效參考。由于結(jié)果是數(shù)字的,而不是“高/低”、“陰/陽”、“正常/不正?!?,所以看起來比較麻煩。確定正常值指標(biāo)一定要知道所做實(shí)驗(yàn)的參考范圍。參考范圍因檢測儀器、方法、試劑的不同而有差異。
5、“+”:陽性,體內(nèi)病毒存在復(fù)制,對應(yīng)于定量方式中HBV-DNA>1x10E3copies/ml。
6、“-”:陰性,病毒的復(fù)制程度低于檢測限。對應(yīng)于定量方式中HBV-DNA<1x10E3copies/ml。
7、定量:HBV-DNA定量單位在報(bào)告單上通常用“copies/ml”、“拷貝數(shù)/ml”或“IV/ml”表示,表示每毫升的血清或血漿中病毒基因組的個(gè)數(shù),該數(shù)據(jù)越大,表明病毒在人體的復(fù)制越厲害,例如“HBV-DNA=4.3x10E3copies/ml”代表每毫升血清中有4.3乘以10的3次方,也即4300個(gè)乙肝病毒。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -乙肝病毒DNA檢測費(fèi)用
乙肝病毒DNA檢測費(fèi)用
乙肝患者到醫(yī)院檢查確診病情或者復(fù)查時(shí),都要進(jìn)行乙肝病毒DNA檢測,這一檢測項(xiàng)目已經(jīng)成為觀察乙肝病毒實(shí)際情況的最重要和最關(guān)鍵的指標(biāo),在抗病毒治療時(shí),也需要進(jìn)行乙肝DNA病毒檢查。
乙肝病毒DNA檢測費(fèi)用受不同因素的影響而有一定差異。乙肝病毒DNA檢測費(fèi)用大概在100元左右。如果用進(jìn)口試劑化驗(yàn)定量大約需要150-200元。
乙肝病毒DNA檢測系統(tǒng)技術(shù)要求嚴(yán)格,對肝病醫(yī)院人員,醫(yī)療技術(shù),環(huán)境有很高的要求,只有正規(guī),具備一定等級的大型醫(yī)院具備乙肝HBV-DNA檢測系統(tǒng)的資格。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -臨床意義
所以說HBV―DNA定量檢測指標(biāo)降低在乙肝治療中有著非常重要的意義,是乙肝轉(zhuǎn)陰的前奏,也是康復(fù)最為關(guān)鍵的一步,只有體內(nèi)的HBV―DNA定量指標(biāo)降低,病毒的復(fù)制繁殖才會(huì)停止,乙肝的徹底治愈才有希望。
乙肝病毒DNA檢測的臨床意義一、對醫(yī)生的診斷和用藥非常重要。通過乙肝病毒DNA檢測能夠判定判斷乙肝患者適合用哪類抗病毒藥物;乙肝病毒DNA檢測對用藥的劑量、用藥時(shí)間、是否需要聯(lián)合用藥以及用藥的效果等提供重要的參考依據(jù),也是臨床上評價(jià)抗病毒或免疫增強(qiáng)藥物療效的最客觀的指標(biāo)。
乙肝病毒DNA檢測的臨床意義二、能夠直接反映乙肝病毒復(fù)制狀態(tài)及傳染性的最佳指標(biāo),通過乙肝病毒DNA的含量能直接反映病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量、是否傳染,傳染性有多強(qiáng)。但是需要說明的一點(diǎn)是:乙肝病毒載量的多少并不代表肝臟的損傷程度,也無法判斷病情的嚴(yán)重程度。
乙肝病毒DNA檢測的臨床意義三、反映病毒復(fù)制的活躍程度,間接地反映機(jī)體的免疫應(yīng)答水平。
乙肝檢查_乙肝病毒DNA檢測 -復(fù)制過程
不同于一個(gè)真正的生物體,病毒并不通過生長和分裂等方式繁殖自身,而是像鑄造機(jī)器零件一樣,按照一定的模具拷貝出來的。病毒DNA中包含有一些程序,指導(dǎo)病毒的遺傳物質(zhì)和其它一些結(jié)構(gòu)蛋白組分增殖。另外,病毒DNA中還包含有一些信息,使得單一組分能夠在細(xì)胞因子的幫助下,自發(fā)組裝成新的病毒顆粒。
在醫(yī)學(xué)上,病毒的繁殖被稱之為“復(fù)制”,在復(fù)制的過程中,有兩個(gè)很重要的因素:一個(gè)是催化劑,另一個(gè)是模板。沒有這兩個(gè)因素,乙肝病毒就不能復(fù)制。乙肝病毒復(fù)制的“催化劑”就是乙肝病毒DNA(即HBV-DNA)聚合酶。沒有這種聚合酶的作用,乙肝病毒的復(fù)制就會(huì)停止。
乙肝病毒的基因組(HBV-DNA)是由兩條螺旋的DNA
鏈圍成的一個(gè)環(huán)形結(jié)構(gòu)。其中一條較長負(fù)鏈已經(jīng)形成完整的環(huán)狀;另一條長度較短的正鏈,呈半環(huán)狀。在感染肝細(xì)胞之后,這條半環(huán)狀的DNA鏈就會(huì)以負(fù)鏈為模板,在催化劑──HBV-DNA聚合酶的作用下延長,最終形成完整的環(huán)狀。這時(shí)的乙肝病毒基因組就形成了一個(gè)完全環(huán)狀的雙股DNA。把這種DNA稱做共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(即cccDNA),可以把它看作是病毒復(fù)制的原始模板。模板形成后,病毒基因會(huì)以其中的一條cccDNA為模板,利用肝細(xì)胞基因中的酶和DNA
聚合酶的“催化”,一段基因又一段基因地復(fù)制,形成負(fù)鏈和正鏈。最后再裝配到一起形成新的HBV-DNA顆粒。
第一步:黏附
HBV人侵人體后,依靠其外膜(表面抗原,HBsAg)能粘附在肝細(xì)胞膜上,當(dāng)然,粘附的首要條件是HBsAg先要識別肝細(xì)胞膜。一旦粘附成功,HBv的外膜也就完成了它的使命,甩掉了外膜,HBV鉆進(jìn)肝細(xì)胞內(nèi)。
第二步:脫殼
HBV核心部分來到肝細(xì)胞內(nèi),在肝細(xì)胞漿中還要脫掉它的“核殼”(核心抗原即HBcAG及E抗原即HbEAG),這樣,就暴露出了它最核心部分,即乙肝病毒核酸(HBv
DNA),HBV大有“赤膊上陣”之意。HBV-DNA包涵著乙肝病毒的全部基因,是它主宰著HBv的復(fù)制的。
第三步:入核
HBv-DNA從肝細(xì)胞漿內(nèi)進(jìn)入肝細(xì)胞核,在這里它要進(jìn)一步發(fā)育完善,形成了HBv的“共價(jià)閉合環(huán)狀脫氧核塘核酸”(HBv
cccDNA)。這個(gè)cccDNA十分了得,它深深藏匿在肝細(xì)胞核內(nèi),而肝細(xì)胞核外面有一層堅(jiān)韌的核膜,目前所有藥物都難以通過這堅(jiān)韌的核膜,因而對cccDNA也無可奈何,但cccDNA卻掌控著HBv所有的遺傳信息,指令著HBv的復(fù)制。因此.現(xiàn)有的藥物想徹底消滅人體內(nèi)的HBv真比登天還難,這些藥物只能抑制HBv的繁殖或復(fù)制,“全部轉(zhuǎn)陰”也只能是一種幻想。
第四步:轉(zhuǎn)錄
HBV在這一階段會(huì)以cccDNA為“模子”,像錄音帶似的把HBv
cccDNA上的所有信息全都轉(zhuǎn)錄到“信息核糖核酸”(mRNA)上。這個(gè)轉(zhuǎn)錄過程需要人體內(nèi)的酶類幫忙,因?yàn)樗械牟《径疾荒茏约邯?dú)立生活.必須有生物的機(jī)體幫忙,才能完成這個(gè)轉(zhuǎn)錄過程。HBv也是這樣。在人體酶類的幫助下完成它的復(fù)制環(huán)節(jié)。
第五步:翻譯
在mRNA上已錄取了HBv的所有信息,然后就是“翻譯”了,其實(shí)就是開始制造病毒蛋白。MRNA通過“翻譯”過程,可將HBv的各種蛋白制造出來,如HBv的外膜蛋白(HBsAg)、核殼蛋白(HBeAg、HBcAg)、HBvDNA多聚酶等;至此,HBv的外膜有了,HBv的核殼也有了,這些東西只是零件,飄浮游離著的,還有重要的HBv最核心部分沒有“制造”山來。
第六步:逆轉(zhuǎn)錄
啥叫“逆轉(zhuǎn)錄””把HBv的遺傳信息從DNA轉(zhuǎn)錄到RNA上叫做“轉(zhuǎn)錄”,是正常的“順轉(zhuǎn)錄”;而將HBv的遺傳信息從RNA上再轉(zhuǎn)錄到DNA上,就叫做“逆轉(zhuǎn)錄”了。那么,HBv的mRNA上的遺傳信息最后就轉(zhuǎn)錄成了HBV的DNA,這時(shí),HBv的最核心部分(即HBv
DNA)也算制造完成。
第七步:組裝
從第五步和第六步的復(fù)制看來,HBv的所有零件均已制作完畢,到了第七步也就簡單了,把這些零件進(jìn)行組裝,裝配妥了,HBv的復(fù)制也算大功告成了。
HBv就是這樣繁殖或復(fù)制的??雌饋砗孟裢?fù)雜,其實(shí)HBv復(fù)制過程是很快的.一個(gè)復(fù)制周期不到48小時(shí)。復(fù)制出的下一代HBv或侵入另外的健康的肝細(xì)胞,或被釋放到血液中去,在人們抽血化驗(yàn)時(shí)也就被檢測到了。
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