硫酸甲酯吩嗪(PMS)反應(yīng)法
琥珀酸脫氫酶能通過一系列人工電子受體,如與PMS(吩嗪二甲酯硫酸鹽),DCPIP(2,6-二氯酚靛酚)等發(fā)生反應(yīng)催化琥珀酸的氧化,而借助這些中間產(chǎn)物的顏色變化,通過分光光度計檢測即可加以定量反映,其反應(yīng)式為:①Succinate+PMS→Fumarate+PMSH2;②PMSH2+DCPIP→PMS+DCPIPH2。DCPIP呈藍(lán)色,標(biāo)準(zhǔn)的吸收光譜在600nm處,這種色澤可因其還原而漸次變淡,從而600nm處的光密度的變化與DCPIP含量成正比,測定2.6-DPIP的還原速度可以推算出SDH的活力。一分子DCPIP被還原,即代表一分子琥珀酸被氧化。故可測定此反應(yīng)系統(tǒng)在600nm處的吸收光度變化,來計算SDH的活性。SDH活性計算:(標(biāo)準(zhǔn)-測定)/標(biāo)準(zhǔn)=μmol/min/mg。
鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]還原法
以鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]和琥珀酸鈉為底物,使琥珀酸脫氫酶催化反應(yīng)將鐵氰化鉀還原為亞鐵氰化鉀[K4Fe(CN)6],K4Fe(CN)6再與Fe3+作用生成普魯士藍(lán),在700nm波長測定吸光值,以檢測普魯士藍(lán)之生成量,作為琥珀酸脫氫酶的還原力,吸光值愈高表示琥珀酸脫氫酶活力愈強。
TTC(氯化三苯四氮唑)法

無色TTC(2,3,5-氯化三苯基四唑)作為人造受氫體,它在細(xì)胞呼吸過程中接受氫,還原成三苯基甲膳(TF)。后者以紅色晶體的形式存在于細(xì)胞內(nèi),采用有機(jī)溶劑(如甲苯、乙酸乙醋、三氯甲烷、丙酮或乙醇等)進(jìn)行萃取。萃取液測定485nm吸光度后,以TTC還原量表示脫氫酶活性,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算TF生成量,進(jìn)而求出TTC-脫氫酶活性。
MTT法
MTT是一種黃顏色的染料?;罴?xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT,同時在細(xì)胞色素C的作用下生成藍(lán)色(或藍(lán)紫色)不溶于水的甲
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